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梯度洗脱方法分离头孢类药物
一、试验方法 Cometro高效液相色谱系统 色谱柱： Kromasil BDS C18，250*4.6mm，5um 流动相：A 磷酸盐缓冲溶液（0.87g磷酸二氢钾与0.22g无水磷酸氢二钠，加水稀释至1000ml，摇匀）-乙腈-三乙胺（95:5:1） B 乙腈 检测波长：254nm 流速：1ml/min 样品：头孢氨苄样品（0.2mg/ml），头孢地嗪钠样品（0.2mg/ml），头孢呋辛钠样品（0.2mg/ml），头孢克洛样品（0.2mg/ml），头孢拉定样品（0.2mg/ml），头孢羟氨苄样品（0.2mg/ml），头孢西丁钠样品（0.2mg/ml），头孢唑肟钠样品（0.2mg/ml），头孢类混合样品。 进样量：10ul 二、实验结果与分析 1. 等度实验 流动相：磷酸盐缓冲溶液-乙腈-三乙胺（80:20:1），将不同样品分别进样，将分析结果叠加到同一张色谱图上。 放大谱图，在3-4min的峰有重叠，若在相同条件下，混合样品中各组分将无法分开。 2. 梯度试验 梯度方案
时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 100 0 15 68 32 18 68 32 20 100 0
Retention Time Theoretical plates (USP) Resolution (USP) 10.145 87953 0.00000 11.895 161617 13.71554 12.518 190195 5.34659 12.735 146310 1.74737 13.022 198555 2.29271 15.637 152900 18.89121 16.270 172834 4.00212 16.497 224280 1.53216
混合物中八种组分完全分开，分离度达到要求。
三、结论
梯度洗脱方法可以通过连续或间断地改变流动相的组成，调节流动相极性，使每个流出组分都有合适的容量因子k′，使在等度系统中无法分离的样品得到良好的分离效果。
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